花卉接種

⑴ 花卉的組織培養需要哪些設備

花卉組織培養是在人工控制的條件下培養花苗，是用現代化手段繁殖花回卉的一種最新技術，因此需答要一定的實驗室和必要的設備以及玻璃器皿和用具等。其中最主要的設備是化學實驗室、接種室和培養室。

化學實驗室內需設置高壓滅菌鍋、分析天平、普通天平、酸度計、重蒸餾水蒸餾器、烘箱、冰箱、顯微鏡等儀器設備。接種室應緊靠培養室，內設超凈工作台、安裝紫外燈。

若沒有接種室，使用無菌接種箱也可以接種。培養室要求清潔、乾燥、保溫性能好，但面積不宜過大，室內安裝多層架子。架子上方安裝有日光燈照明，並裝有空氣調節器控制溫度。此外，還需要置備常用的大量試管、三角瓶、容量瓶、燒杯、量筒等玻璃器皿以及鑷子、小型剪刀、解剖刀、接種針等用具。

⑵ 花卉的組織培養有哪幾個步驟

組織培養的步驟：（1）器具的消毒：組培前玻璃器皿等要用洗衣粉刷洗干凈備用。接種室和超凈工作台用70%酒精擦洗，並用紫外光照射。其他用具也要進行高溫消毒。

（2）培養材料的採集：組培所用的植物材料很廣泛，可採用根、莖、葉、花、芽及種子的子葉、胚軸的一部分，有時也可利用花粉或花葯。通常應取初生幼嫩的材料，因為這部分材料分生能力強。不論採集花卉的哪一部分材料，這些材料在移入培養基時都必須保持鮮嫩狀態，否則組培將會失敗。

（3）培養材料的消毒：先將採集來的材料用自來水沖洗干凈，再用蒸餾水沖洗2～3遍，然後用無菌紗布將材料上的水分吸干，切成小塊，放入70%酒精中浸泡15～30秒，再用30%漂白粉澄清液浸泡20分鍾消毒，最後用無菌水沖洗3～5遍，使之徹底消毒滅菌。

（4）制備外植體：將上述經過滅菌的材料，用在火焰上消過毒的刀、剪、鑷，在消毒濾紙上剝去芽的鱗片，嫩枝的外皮和種皮胚乳等，然後切成長0.2～0.5厘米的小片，這些小片就是外植體。在操作過程中，嚴禁用手觸動這些材料。

（5）接種培養：在無菌條件下將切好的外植體立即接種在培養基上。接種後所用試管和三角瓶都要用無菌葯棉封口，放培養室培養架上培養。培養架可用木製或鐵制的，一般分為4～5層，每層高40～50厘米，日光燈裝在上方，架長1.2米左右，與40瓦日光燈管長一致，寬80～90厘米，每一層可裝兩支日光燈，照度為2000～2500勒克斯。每天日光燈照明12～16小時。溫度大多採用日夜恆溫培養，以保持在25攝氏度0攝氏度。也可採用變溫培養，夜間溫度略低於白天。

⑶ 花卉類病毒的診斷和鑒定方法有哪些

類病毒因為不具有外殼蛋白，所以不能用血清學、電鏡等方法來診斷和檢測。類病毒常用的檢測方法有生物學檢測、雙向電泳、RT-PCR和分子雜交等方法。

1 生物學檢測

利用類病毒的特異鑒別寄主來診斷和檢測。如菊花矮化類病毒（CSVd），可以從待檢樣品中抽提低分子RNA，接種到特定的指不植物，如菊花的Mistletm品種、爪哇三七（Gynura auanyiana）、番茄（Lycopersicon esculentum）。接種緩沖液的組成是100mmolTris，10mmolEDTA，pH7.5。接種時用沾有接種原的剎須刀在菊花和爪哇三七的莖部輕輕切割5～10刀，再用棉棒塗抹。番茄可以用4～5葉期的幼苗直接用塗抹法接種。被接種植物放在30℃左右的溫室培育，觀察症狀。接種36d後，菊花上出現黃色斑點，頂葉較少，從上數第3～5葉上症狀更明顯。接種45d後，爪哇三七出現頂葉捲曲症狀。但沒有柑橘裂皮病類病毒接種時症狀明顯。接種60d後，番茄上不表現任何症狀。但回接菊花的Mistletm品種，證明CSVd在番茄上屬於潛伏侵染。

生物檢測需要嚴格的溫度條件，如果溫度條件控制不嚴格便難以得到可信的結果。此外，檢測批量樣品，還需要較大的空間。

22 雙向電泳檢測

2.1 核酸的抽提

抽提緩沖液的組成為0.13mol Tris-HCl、0.017mol EDTA、1mol LiCl、0.83%DS，5%PVP，簡稱為TESLP。1g鮮菊花葉片加2～5倍體積的TESLP緩沖液磨碎，加入等體積的水飽和酚∶氯仿（1∶1）處理，離心分離後用乙醇沉澱回收全核酸。之後用methoxy ethaml除去多糖，用CTAB回收核酸，加等體積的4mol的LiCl，離心回收2mol LiCl的可溶組分，用乙醇沉澱濃縮後溶於適當體積的TE（10mmol Tris-HCl，1mmol EDTA，pH8.0）溶液中。

2.2 正反向電泳

按照Singh等的方法進行。首先在室溫下用1倍TBE電泳緩沖液分離核酸，直到染料XC-FF達近底部的7.5%為止。然後換成加熱到沸騰的0.125倍TBE電泳緩沖液，顛倒正負極並用表面加熱器保持電泳板的溫度在80℃以上，直到染料XC-FF到達膠的上端。電泳完後用銀染色觀察核酸的有無（圖1）。

圖1 正反向電泳法檢測菊花矮化類病毒RNA示意圖

與生物接種相比，正反向電泳凝膠電泳檢測菊花矮化類病毒，可以從相當於2.8mg鮮重的菊花樣品中檢測到菊花矮化類病毒CSVd，並同時可檢測10～20個樣品材料。總之，制備用於正反向電泳的粗核酸的方法簡便，需要的鮮葉量少，可以作為該類病毒的常規檢測方法。正反向電泳凝膠電泳與雙向凝膠電泳比較，省去了第一項電泳完後割膠回收的試驗步驟，操作更為簡便。

⑷ 植物培養材料的處理及滅菌是怎樣的

花卉組織培養通常取嫩莖花托葉柄葉片等作為接種的材料，統稱為外植體一般選擇幼嫩的部分，草花用嫩莖花托，球根花卉用莖頂鱗莖盤鱗葉剪取的材料先行清理，去除多餘部分，然後用洗滌液清洗表面，再用流水緩緩沖洗1~2小時清洗後放在超凈台上，用與材料相同體積的殺菌劑處理滅菌處理結束後立即用無菌水漂洗4~5次，放入瓶中備用

各種殺菌劑的用法

⑸ 盆栽花卉組織培養技術流程有哪些

（1）外植體的選擇 常用的外植體有兩類，一類是帶芽的外植體，如莖尖、側芽、鱗芽、原球莖等，一類根、莖、葉等營養器官和花葯、花瓣、花軸、花萼、胚珠、果實等生殖器官。其中最常用的外植體是莖尖，通常切塊在0.5厘米左右，培養脫毒種苗，常用莖尖分生組織部，長度為0.1毫米以下。

（2）外植體的滅菌 常用的消毒劑有次氯酸鈣、升汞、次氯酸鈉、雙氧水、70%酒精等。

（3）外植體接種 外植體接種需在無菌條件下進行。工作人員應穿工作服，戴口罩，用70%酒精擦手，超凈工作台上要用70%酒精擦凈。接種用的剪刀、鑷子和器皿都要求無菌。接種後的培養容器置培養室，室溫應控制在23～26℃，每天12～16小時光照，光照度為1000～3000勒克斯。

（4）誘導側芽、不定芽或胚狀體 常用的基本培養基為MS培養基。激素的種類和濃度對外植體的分化和增殖起著重要的作用，不同的花卉對激素的種類和濃度要求有差異。

（5）誘導生根 繼代培養形成的不定芽和側芽等一般沒有根，要促使試管苗生根，須轉移到生根培養基上，生根培養基一般應用1／2MS培養基，因為降低無機鹽濃度有利於根的分化。不同盆栽花卉誘導生根時所需要的生長素的種類和濃度不同，一般常用吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）和吲哚丁酸（IBA）三種。

（6）煉苗 首先打開試管瓶塞，放陽光充足處讓其鍛煉1～2天，然後取出幼苗，用溫水將瓊脂沖洗掉，移栽到泥炭、珍珠岩、蛭石、礱糠灰等組成的基質中。基質使用前需高溫消毒。移栽後要適當遮蔭，可用塑料薄膜覆蓋，保持較高空氣濕度，溫度維持在25℃左右，勿使陽光直曬。7～10天後要注意通風和補充澆水。20～40天，新梢開始生長後，小苗可轉入正常管理。