花卉接种

⑴ 花卉的组织培养需要哪些设备

花卉组织培养是在人工控制的条件下培养花苗，是用现代化手段繁殖花回卉的一种最新技术，因此需答要一定的实验室和必要的设备以及玻璃器皿和用具等。其中最主要的设备是化学实验室、接种室和培养室。

化学实验室内需设置高压灭菌锅、分析天平、普通天平、酸度计、重蒸馏水蒸馏器、烘箱、冰箱、显微镜等仪器设备。接种室应紧靠培养室，内设超净工作台、安装紫外灯。

若没有接种室，使用无菌接种箱也可以接种。培养室要求清洁、干燥、保温性能好，但面积不宜过大，室内安装多层架子。架子上方安装有日光灯照明，并装有空气调节器控制温度。此外，还需要置备常用的大量试管、三角瓶、容量瓶、烧杯、量筒等玻璃器皿以及镊子、小型剪刀、解剖刀、接种针等用具。

⑵ 花卉的组织培养有哪几个步骤

组织培养的步骤：（1）器具的消毒：组培前玻璃器皿等要用洗衣粉刷洗干净备用。接种室和超净工作台用70%酒精擦洗，并用紫外光照射。其他用具也要进行高温消毒。

（2）培养材料的采集：组培所用的植物材料很广泛，可采用根、茎、叶、花、芽及种子的子叶、胚轴的一部分，有时也可利用花粉或花药。通常应取初生幼嫩的材料，因为这部分材料分生能力强。不论采集花卉的哪一部分材料，这些材料在移入培养基时都必须保持鲜嫩状态，否则组培将会失败。

（3）培养材料的消毒：先将采集来的材料用自来水冲洗干净，再用蒸馏水冲洗2～3遍，然后用无菌纱布将材料上的水分吸干，切成小块，放入70%酒精中浸泡15～30秒，再用30%漂白粉澄清液浸泡20分钟消毒，最后用无菌水冲洗3～5遍，使之彻底消毒灭菌。

（4）制备外植体：将上述经过灭菌的材料，用在火焰上消过毒的刀、剪、镊，在消毒滤纸上剥去芽的鳞片，嫩枝的外皮和种皮胚乳等，然后切成长0.2～0.5厘米的小片，这些小片就是外植体。在操作过程中，严禁用手触动这些材料。

（5）接种培养：在无菌条件下将切好的外植体立即接种在培养基上。接种后所用试管和三角瓶都要用无菌药棉封口，放培养室培养架上培养。培养架可用木制或铁制的，一般分为4～5层，每层高40～50厘米，日光灯装在上方，架长1.2米左右，与40瓦日光灯管长一致，宽80～90厘米，每一层可装两支日光灯，照度为2000～2500勒克斯。每天日光灯照明12～16小时。温度大多采用日夜恒温培养，以保持在25摄氏度0摄氏度。也可采用变温培养，夜间温度略低于白天。

⑶ 花卉类病毒的诊断和鉴定方法有哪些

类病毒因为不具有外壳蛋白，所以不能用血清学、电镜等方法来诊断和检测。类病毒常用的检测方法有生物学检测、双向电泳、RT-PCR和分子杂交等方法。

1 生物学检测

利用类病毒的特异鉴别寄主来诊断和检测。如菊花矮化类病毒（CSVd），可以从待检样品中抽提低分子RNA，接种到特定的指不植物，如菊花的Mistletm品种、爪哇三七（Gynura auanyiana）、番茄（Lycopersicon esculentum）。接种缓冲液的组成是100mmolTris，10mmolEDTA，pH7.5。接种时用沾有接种原的刹须刀在菊花和爪哇三七的茎部轻轻切割5～10刀，再用棉棒涂抹。番茄可以用4～5叶期的幼苗直接用涂抹法接种。被接种植物放在30℃左右的温室培育，观察症状。接种36d后，菊花上出现黄色斑点，顶叶较少，从上数第3～5叶上症状更明显。接种45d后，爪哇三七出现顶叶卷曲症状。但没有柑橘裂皮病类病毒接种时症状明显。接种60d后，番茄上不表现任何症状。但回接菊花的Mistletm品种，证明CSVd在番茄上属于潜伏侵染。

生物检测需要严格的温度条件，如果温度条件控制不严格便难以得到可信的结果。此外，检测批量样品，还需要较大的空间。

22 双向电泳检测

2.1 核酸的抽提

抽提缓冲液的组成为0.13mol Tris-HCl、0.017mol EDTA、1mol LiCl、0.83%DS，5%PVP，简称为TESLP。1g鲜菊花叶片加2～5倍体积的TESLP缓冲液磨碎，加入等体积的水饱和酚∶氯仿（1∶1）处理，离心分离后用乙醇沉淀回收全核酸。之后用methoxy ethaml除去多糖，用CTAB回收核酸，加等体积的4mol的LiCl，离心回收2mol LiCl的可溶组分，用乙醇沉淀浓缩后溶于适当体积的TE（10mmol Tris-HCl，1mmol EDTA，pH8.0）溶液中。

2.2 正反向电泳

按照Singh等的方法进行。首先在室温下用1倍TBE电泳缓冲液分离核酸，直到染料XC-FF达近底部的7.5%为止。然后换成加热到沸腾的0.125倍TBE电泳缓冲液，颠倒正负极并用表面加热器保持电泳板的温度在80℃以上，直到染料XC-FF到达胶的上端。电泳完后用银染色观察核酸的有无（图1）。

图1 正反向电泳法检测菊花矮化类病毒RNA示意图

与生物接种相比，正反向电泳凝胶电泳检测菊花矮化类病毒，可以从相当于2.8mg鲜重的菊花样品中检测到菊花矮化类病毒CSVd，并同时可检测10～20个样品材料。总之，制备用于正反向电泳的粗核酸的方法简便，需要的鲜叶量少，可以作为该类病毒的常规检测方法。正反向电泳凝胶电泳与双向凝胶电泳比较，省去了第一项电泳完后割胶回收的试验步骤，操作更为简便。

⑷ 植物培养材料的处理及灭菌是怎样的

花卉组织培养通常取嫩茎花托叶柄叶片等作为接种的材料，统称为外植体一般选择幼嫩的部分，草花用嫩茎花托，球根花卉用茎顶鳞茎盘鳞叶剪取的材料先行清理，去除多余部分，然后用洗涤液清洗表面，再用流水缓缓冲洗1~2小时清洗后放在超净台上，用与材料相同体积的杀菌剂处理灭菌处理结束后立即用无菌水漂洗4~5次，放入瓶中备用

各种杀菌剂的用法

⑸ 盆栽花卉组织培养技术流程有哪些

（1）外植体的选择 常用的外植体有两类，一类是带芽的外植体，如茎尖、侧芽、鳞芽、原球茎等，一类根、茎、叶等营养器官和花药、花瓣、花轴、花萼、胚珠、果实等生殖器官。其中最常用的外植体是茎尖，通常切块在0.5厘米左右，培养脱毒种苗，常用茎尖分生组织部，长度为0.1毫米以下。

（2）外植体的灭菌 常用的消毒剂有次氯酸钙、升汞、次氯酸钠、双氧水、70%酒精等。

（3）外植体接种 外植体接种需在无菌条件下进行。工作人员应穿工作服，戴口罩，用70%酒精擦手，超净工作台上要用70%酒精擦净。接种用的剪刀、镊子和器皿都要求无菌。接种后的培养容器置培养室，室温应控制在23～26℃，每天12～16小时光照，光照度为1000～3000勒克斯。

（4）诱导侧芽、不定芽或胚状体 常用的基本培养基为MS培养基。激素的种类和浓度对外植体的分化和增殖起着重要的作用，不同的花卉对激素的种类和浓度要求有差异。

（5）诱导生根 继代培养形成的不定芽和侧芽等一般没有根，要促使试管苗生根，须转移到生根培养基上，生根培养基一般应用1／2MS培养基，因为降低无机盐浓度有利于根的分化。不同盆栽花卉诱导生根时所需要的生长素的种类和浓度不同，一般常用吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）和吲哚丁酸（IBA）三种。

（6）炼苗 首先打开试管瓶塞，放阳光充足处让其锻炼1～2天，然后取出幼苗，用温水将琼脂冲洗掉，移栽到泥炭、珍珠岩、蛭石、砻糠灰等组成的基质中。基质使用前需高温消毒。移栽后要适当遮荫，可用塑料薄膜覆盖，保持较高空气湿度，温度维持在25℃左右，勿使阳光直晒。7～10天后要注意通风和补充浇水。20～40天，新梢开始生长后，小苗可转入正常管理。